产品简介

本产品可以从动物细胞或组织中方便高效地分离细胞核蛋白和细胞浆蛋白, 其可逐步裂解细胞, 将完整的细胞核从细胞质中分离出来,然后从细胞核中提取出细胞核蛋白。

本产品含有强效去污剂, 提取的核蛋白不仅包括核膜蛋白, 也包括组蛋白和核内转录因子等可溶性蛋白。传统试剂盒核质分离后, 核蛋白提取时间通常在30~40min之间, 而本产品将核蛋白提取时间控制在10min。此外, 本产品提取的核蛋白量显著高于其它试剂盒,且核质分离效果显著,尤其适用于Western Blot实验。

产品内容

使用说明

• 将试剂盒各组分置于冰上，其中试剂A和试剂C使用时请添加1×蛋白酶抑制(货号：GRF101)或1×蛋白酶和磷酸酶抑制剂(货号：GRF103)。

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  动物细胞
  1. 贴壁细胞：弃去培养皿中的培养基，加入适量PBS缓冲液(货号:CB012)，用细胞刮刀将细胞从培养皿表面刮下，将细胞重悬转移至离心管中。300×g离心5min，吸弃上清；
      悬浮细胞：将细胞转移至离心管中，300×g离心5min，吸弃上清；再加入适量PBS缓冲液重悬细胞，300×g离心5min，吸弃上清。
  2. 用适量PBS重悬细胞，取2×10⁶个细胞置于1.5mL离心管中，300×g离心5min，吸弃上清；
  3. 向细胞沉淀中加入200μL试剂A，充分混匀后，冰上静置10min；
  4. 向上步所得细胞悬液中再加入10μL试剂B，最高速涡旋振荡5sec，冰上静置1min；
  5. 再进行最高速涡旋振荡5sec，冰上静置2min；
      注意：对于不同种类的细胞，此步骤的冰浴时间可适当延长(3min)或缩短(1min)，避免出现沉淀聚集现象即可。
  6. 将孵育后的细胞离心10min(1,600×g，4℃)，小心吸去含有胞浆蛋白的上清液，如有需要可转移至新离心管中，置于冰上或分装后储存于-80℃备用；
      注意：吸头切勿触及细胞沉淀，为降低胞浆组分对细胞核组分的污染，可以在沉淀上方保留极小体积的上清，换用10μL吸头尽可能吸尽上清。
  7. 加入200μL试剂A重悬细胞沉淀，充分混匀后，立即离心5min(13,000×g，4℃)，弃尽上清；
      注意：沉淀含有细胞核，可以在沉淀上方保留极小体积的上清，换用10μL吸头吸尽上清。
  8. 向沉淀中加入100μL试剂C，充分混匀后，最高速涡旋振荡10sec，置于冰上，在10min内每隔2min重复涡旋一次；
  9. 将上步孵育后的细胞沉淀离心10min(13,000×g，4℃)，将含有可溶性细胞核蛋白的上清液转移至新离心管中，置于冰上或分装后储存于-80℃备用。

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  动物组织
  1. 把20~80mg动物组织尽可能剪成小的碎片置于2mL离心管中(可在组织中加入适量PBS缓冲液，使用注射器的活塞柄进行研碎)，离心3min(1,600×g ,4℃)收集碎片沉淀；
  2. 向组织碎片中加入试剂A，转移至1~2mL匀浆器中，在冰上进行充分匀浆。按照表1所推荐的试剂体积进行细胞浆 和细胞核蛋白提取；
      注意：为充分转移组织小块，可用剪刀剪短移液器吸头末端，便于使用移液器吸起组织小块。
  
  3. 把匀浆液转移至干净预冷的离心管中，冰上孵育15min；
  4. 将试剂B加入匀浆液中，最高速涡旋振荡5sec，冰上静置1min；
  5. 再进行最高速涡旋振荡5sec，冰上静置2min；
  6. 将孵育后的匀浆液离心10min(1,600×g，4℃)，小心吸去含有胞浆蛋白的上清液，如有需要可转移至新离心管中，置于冰上或分装后储存于-80℃备用;
      注意：吸头切勿触及细胞沉淀，为降低胞浆组分对细胞核组分的污染，可以在沉淀上方保留极小体积的上清，用10μL吸头尽可能吸尽上清。
  7. 加入与步骤2等体积的试剂A重悬细胞沉淀，充分混匀后，立即离心5min(13,000×g，4℃)，弃尽上清；
      注意：沉淀含有细胞核，以在沉淀上方保留极小体积的上清，换用10μL头吸尽上清。
  8. 向沉淀中加入试剂C，充分混匀后，最高速涡旋振荡10sec，置于冰上，在10min内每隔2min重复涡旋—次；
  9. 将上步孵育后的细胞沉淀离心10min(13,000×g，4℃)，将含有可溶性细胞核蛋白的上清液转移至新离心管中，置于冰上或分装后储存于-80℃备用。