琼脂糖磁珠(Magarose Beads)系列产品是医学与分子生物学研究中重要的载体工具,其粒径相对集中,表面布满丰富的羟基官能团,具有超顺磁性以及快速磁响应性等特点。
Protein G琼脂糖磁珠是由琼脂糖磁珠(Magarose Beads)与Protein G共价结合形成的复合微粒,其具有更高的抗体结合能力和较低的非特异蛋白吸附率,洗脱条件更均一,一步纯化即可从血清样品中分离出纯度大于90%的抗体。因其本身为微米级磁性微球,所以不需要离心操作,可大幅度缩短抗体吸附所需的时间。
本产品适用于血浆、腹水以及组织培养上清液等样品中的抗体纯化,也可用于抗体固定及其它相关研究。
样本处理
1. 上样之前要确保样品溶液有合适的离子强度和pH值,可以用结合/漂洗缓冲液对血清、腹水或细胞培养液等样品进行稀释,或者也可以将样品用结合/漂洗缓冲液透析。样品在上样前建议离心或用0.22μm或0.45μm滤膜过滤,以减少杂质,提高蛋白纯化效率;
磁珠预处理
2. 将Protein G琼脂糖磁珠颠倒数次,使其充分混匀,取所需量的磁珠悬液,转移至离心管中,接着在磁力架上静置1 min,待磁珠吸附到离心管侧壁上后,吸弃上清;
3. 加入1~2倍琼脂糖磁珠体积的结合/漂洗缓冲液,用移液器反复吹打5次,接着在磁力架上静置1min,待磁珠吸附到离心管侧壁上后,吸弃上清;
4. 重复步骤 3 两次;;
抗体与磁珠结合
5. 结合:将上述预处理好的磁珠与样品混合,置于翻转混合仪上孵育(常温30~60min),接着在磁力架上静置1min,待磁珠吸附到离心管侧壁上,溶液变澄清后,把上清液转移到新的离心管中备用(上清液可用于检测抗体是否存在残留),离心管中剩余的即为抗体-磁珠复合物;
6. 洗涤:在上一步得到的抗体-磁珠复合物中加入5倍琼脂糖磁珠体积的结合/漂洗缓冲液,用移液器反复吹打5次,接着在磁力架上静置1min,待磁珠吸附到离心管侧壁上,溶液变澄清后,吸弃上清。再重复此步骤两次;
洗脱
7. 向洗涤后的抗体-磁珠复合物中加入3~5倍琼脂糖磁珠体积的洗脱缓冲液,用移液器反复吹打5次,置于翻转混合仪上孵育(常温5~10min),接着在磁力架上静置1min,待磁珠吸附到离心管侧壁上,溶液变澄清后,吸取上清,收集洗脱组分,即为目标抗体;
中和
8. 向洗脱组分中加入1/10洗脱体积的中和缓冲液,调节pH值至7.0~8.0;
磁珠保存
9. 使用后的琼脂糖磁珠用 1~3 倍磁珠体积的 洗脱缓冲液重悬磁珠,接着在磁力架上静置1min,待磁珠吸附到离心管侧壁上,溶液变澄清后,吸弃上清。重复两次;
10. 加入1~3倍琼脂糖磁珠体积的结合/漂洗缓冲液重悬磁珠,接着在磁力架上静置1min,待磁珠吸附到离心管侧壁上,溶液变澄清后,吸弃上清;
11. 加入4~5倍琼脂糖磁珠体积的20%乙醇,置于 2~8℃保存。
1. 琼脂糖磁珠使用前应充分混匀;
2. 琼脂糖磁珠应保存在储存溶液中,防止干燥;
3. 请勿将琼脂糖磁珠冷冻或离心,以免引起不可逆聚集;
4. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作;
5. 本产品仅限科研使用。