产品简介

本试剂盒创新性地采用过柱纯化的方法，能够快速、温和、高效地裂解动物组织或细胞，有效提取总蛋白。试剂盒同时提供变性和天然两种裂解液，用户可根据下游实验需求进行选择。整个提取过程仅需要1~8min，由于采用过柱纯化技术，最小可处理20μL样本与裂解液混合物，最大可达500μL，提取的蛋白溶液浓度可达2~8mg/mL，并可有效避免蛋白丢失。所提蛋白可采用BCA法进行蛋白定量分析(货号：ZJ101或ZJ102)，但不宜使用Omni-Rapid^TM快速蛋白定量试剂盒(货号：ZJ103)。

产品内容

使用说明

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  提取变性总蛋白
  1. 将纯化柱及收集管放在冰上预冷；
  2. 样品处理(取适当量的变性裂解液，在使用前数分钟将蛋白酶抑制剂混合液 按1:100加入其中；PC201plus已包含蛋白酶抑制剂混合液，PC201则需额外购买<货号：grf101>。)
      2a. 贴壁细胞：将预冷的1×PBS(货号：PS110)直接加入培养板、培养皿或培养瓶中清洗贴壁细胞，吸去上清。按照附表(文末)中将相应体积的变性裂解液均匀地加入整个器皿表面，用移液器吹打几次；
      2b. 悬浮细胞：低速离心收集细胞，在1.5 mL离心管中加入预冷的1×PBS，涡旋震荡，3,000rpm离心2~3min清洗细胞。吸去多余上清，留下与细胞相同体积的PBS，涡旋震荡重悬细胞。加入附表中相应体积的变性裂解液，涡旋震荡裂解细胞；
      注意：
          ①部分未完全裂解的细胞不会影响后续蛋白提取效果；
          ②加入裂解液后，如果细胞裂解物太过粘稠，无法用200~1,000μL吸头吹打，可将细胞裂解物直接倒入纯化柱中，进行后续操作。
      2c. 组织样本：将15~20mg组织放置于纯化柱上，用塑料研磨棒扭转研磨50~60次，加入200μL变性裂解液，继续研磨30~60次。如样本起始量较大或者较小，需按比例调整相应裂解液的用量；
      注意：塑料研磨棒可以重复使用，请用蒸馏水彻底冲洗干净，并用纸巾擦干。
  3. 离心
      3a. 贴壁细胞或悬浮细胞：将裂解后的细胞转移到预冷的纯化柱套管中，14,000~16,000 rpm离心30 s取出；
      3b. 组织样本：盖上纯化柱盖子室温孵育1~2 min，14,000~16,000 rpm离心1~2 min取出；
  4. 立刻将收集管放置于冰上，弃去纯化柱，变性总蛋白提取完成。

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  提取天然总蛋白
  1. 将天然裂解液、纯化柱及收集管放在冰上预冷；
  2.样品处理(取适当量的天然裂解液，在使用前数分钟将蛋白酶抑制剂混合液按1:100加入其中；PC201plus已包含蛋白酶抑制剂混合液，PC201则需额外购买<货号：grf101>。)
      2a. 贴壁细胞：将预冷的1×PBS(货号：PS110)直接加入培养板，培养皿或培养瓶中清洗贴壁细胞，吸去上清。按照附表中将相应体积的天然裂解液均匀地加入整个器皿表面，放置于冰上孵育3~5min，用移液器吹打几次；
      2b. 悬浮细胞：低速离心收集细胞，在1.5mL离心管中加入预冷的1×PBS，涡旋震荡，3,000rpm离心2~3min清洗细胞。吸去多余上清，留下与细胞相同体积的PBS，涡旋震荡重悬细胞。加入附表中相应体积的天然裂解液，涡旋震荡裂解细胞15s。将离心管放置于冰上3~5min，然后涡旋震荡10s；
      注意：
          ①部分未完全裂解的细胞不会影响后续蛋白提取效果；
          ②加入裂解液后，如果细胞裂解物太过粘稠，无法用200~1,000 μL吸头吹打，可将细胞裂解物直接倒入纯化柱中，进行后续操作。
      2c. 组织样本：将15~20mg组织放置于纯化柱上，用塑料研磨棒扭转研磨50~60次，加入200μL天然裂解液，继续研磨30~60次。如样本起始量较大或者较小，需按比例调整相应裂解液的用量；
      注意：塑料研磨棒可以重复使用，请用蒸馏水彻底冲洗干净，并用纸巾擦干。
  3.离心
      3a. 贴壁细胞或悬浮细胞：将裂解后的细胞转移到预冷的纯化柱套管中，14,000~16,000rpm离心30s取出；
      3b. 组织样本：开盖冰上孵育5min，盖上纯化柱盖子，4℃，14,000~16,000rpm离心1~2min取出；
  4.立刻将收集管放置于冰上，弃去纯化柱，天然总蛋白提取完成。
  
  

附表 细胞数量与所需裂解液体积之间的关系