产品简介

膨胀显微成像技术(expansion microscopy，ExM)是一种新型超分辨成像技术。该技术借助可膨胀水凝胶均匀地放大生物样本，在常规光学宽场条件下轻松实现高分辨成像，在普通共聚焦条件下实现超分辨成像。蛋白质、核酸、脂质等生物大分子均可借助ExM进行超分辨成像。本产品经过系统优化和验证，适用于石蜡组织切片或冰冻组织切片，可将样本在三维方向均匀的放大4~6倍，相应的空间分辨率也能提高4~6倍。由于是空间的均匀拉伸，膨胀后，生物分子的空间分布关系不受影响。

产品内容

自备材料

• 载玻片、5mL或15mL离心管、倒置荧光显微镜。

使用说明

• 将组织切片放置在载玻片的背面上 ( 目的是降低组织切片和载玻片之间的吸附力 )，进行常规免疫荧光实验流程操作后，利用本试剂盒完成下述过程。
  特别注意：
  ①需将原荧光抗体浓度提高 5~10倍 使用，详见注意事项3；
  ②请确保组织切片的面积小于制胶模具的内框 (如图所示)。
  

• 1. 配胶：将缓冲液 A Plus、缓冲液 B 和缓冲液 C 按照下表比例混合配制成胶溶液，一般使用 300 μL 胶溶液即可完全覆盖细胞样本；
  

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• 2. 灌胶：撕去制胶模具背面的贴纸，将其粘在载玻片上，使组织切片位于其内框中间，向内框注入胶溶液，然后盖上塑料膜 （如下图所示），4℃避光孵育 1 h，接着转移至 37℃恒温箱再避光孵育 1 h，确保胶完全凝固；
  

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• 3. 拆胶：请小心地拆除制胶装置，将凝胶取出，可以看到样本已附着在凝胶的表面；
      注意：凝胶会有些干粘，可以滴加少量步骤 4 中配制的混合缓冲液润湿，以便顺利取下。
  4. 组织均一化：取 3 mL 缓冲液 E 至 5 mL 或 15 mL 离心管中，向其中加入3 μL缓冲液 D，充分混匀后，将凝胶样本浸没于其中，盖上管盖，放入 37℃恒温箱避光孵育 1~2 h (脑组织切片孵育 1 h 即可，胎盘、肝脏、肾脏、胚胎、结直肠等组织切片需孵育 2 h)；
  5. 清洗：将均一化后的凝胶样本用纯净水清洗 2 次；
  6. 膨胀：将清洗后的凝胶样本置于约100 mL纯净水中 (需确保容器洁净且宽敞)，避光室温膨胀 6 h 或者 4℃过夜膨胀后，倒出多余水分，小心取出凝胶样本，裁成合适的尺寸，将凝胶有组织样本的一面朝下，置于玻底培养皿中，添加少量纯净水，使样本保持湿润且不会在水中飘动。膨胀后的凝胶不需要封片，直接选择合适的倒置荧光显微镜观察或拍照。
      注意：①玻底培养皿更适合在油镜下观察或拍照，如果使用空气镜，成像效果可能会不理想，可将膨胀后的凝胶置于载玻片上，滴加少量纯净水，进行观察或拍照；
                 ②DAPI 在凝胶膨胀过程中会与核酸脱离，因此如需染核，需在膨胀后将凝胶置于纯净水配制的 DAPI 染液 中复染 5 min，用纯净水洗去染液，进行显微镜观察或拍照。切勿使用 PBS 配制 DAPI 染液，否则会缩胶。