产品简介

膨胀显微成像技术(expansion microscopy，ExM)是一种新型超分辨成像技术。该技术借助可膨胀水凝胶均匀地放大生物样本，在常规光学宽场条件下轻松实现高分辨成像，在普通共聚焦条件下实现超分辨成像。蛋白质、核酸、脂质等生物大分子均可借助ExM进行超分辨成像。本产品经过系统优化和验证，适用于细胞爬片免疫荧光实验，可将 样本在三维方向均匀的放大4.5倍左右，相应的空间分辨率也能提高4倍左右。例如，可将普通宽场显微镜250nm左右的分辩率提高到约90nm，共聚焦显微镜的120nm左右发分辨率提高到约50nm。由于空间的均匀拉伸，膨胀后，生物分子的空间分布关系不受影响。与光学方法相比，膨胀显微镜具有成本低、成像深度高等优点。

产品内容

自备材料

• 细胞爬片/载玻片、湿盒、倒置荧光显微镜。

使用说明

• 按免疫荧光实验流程操作，获得经荧光染色的细胞爬片后，利用本试剂盒完成下述过程。
  特别注意：
  ①需将原荧光抗体浓度提高4~8倍使用，原因详见注意事项3；
  ②以下操作步骤以9mm细胞爬片为例，如使用其它规格细胞爬片，可根据情况调整各试剂用量。
  1. 固定：用ddH₂O润洗细胞爬片后，向细胞样品上滴加200μL缓冲液A，室温避光孵育30min。孵育完成后去除缓冲液A，并用ddH₂O清洗细胞爬片，吸干水分；
  2. 配胶：将缓冲液B、缓冲液C和缓冲液D按照下表比例混合配制成胶溶液，以9mm细胞爬片为例，一般使用200μL反应液可完全覆盖细胞样本；
  

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• 3. 灌胶：将两张绿色玻璃片光滑面贴合载玻片且将细胞爬片夹在中间，留出空间并加入胶溶液，然后盖上盖玻片，避光反应30min；
      注意：为了促进绿色玻璃片与载玻片的贴合，可以在两者之间滴加约10μL ddH₂O。
  4. 拆胶：拆去盖玻片及两侧绿色玻璃片；
      注意：玻璃易碎，请做好眼部防护，可用移液器吸头缓慢拆除。
  5. 膨胀：将样本投入过量的水中，室温膨胀2h后或者4℃过夜膨胀，倒出多余水分，小心取出胶体样本，裁成合适的尺寸，置于玻底培养皿中，添加少量ddH₂O，使样品保持湿润且不会在水中飘动。膨胀后的凝胶不需要封片，请将凝胶有细胞的一面朝下(有爬片凹痕的那一面)，直接选择合适的倒置荧光显微镜观察或拍照。
      注意：①玻底培养皿更适合在油镜下观察或拍照，如果使用空气镜，成像效果可能会不理想，可将膨胀后的凝胶置于载玻片上，添加少量ddH₂O，进行观察或拍照；
                 ②膨胀过程中，玻璃爬片会与凝胶分离，样本已转移至凝胶中;
                 ③DAPI在凝胶膨胀过程中会与核酸脱离，因此如需染核，需在膨胀后将凝胶置于ddH₂O配制的DAPI染液中复染5min，用ddH₂O洗去染液，进行显微镜观察或拍照。不要使用PBS配制DAPI染液，否则会缩胶。
  

• 操作示意图
  

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