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低毒高效转染试剂

蛋白过表达试剂盒

低毒高效转染试剂

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规格
0.5mL

本产品需冰袋运输;保存于-20℃,保质期12个月。建议分装保存,若短期使用,可保存于2~8℃,5个月有效; 若需长期保存,可置于-80℃,24个月有效。

价格

¥298.00元

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产品简介

本产品是一款低毒多功能高效转染试剂,同时适用于 DNA、RNA 及共转染应用,并且兼容血清和抗生素,有利于维持细胞的最佳状态。


本产品适用范围:大多数常规细胞、难转染细胞、原核细胞及干细胞的转染。

产品特点

  • 性能卓越

    经30余种细胞测试,包括常见细胞及难转染细胞,均可高效转染DNA和RNA
  • 作用温和

    毒性低,且不受血清和抗生素影响,无需更换细胞培养液,特别适用于敏感细胞
  • 操作简便

    转染试剂无需稀释,直接向稀释后的核酸中加入孵育即可
  • 通用性强

    同时适用于DNA、RNA及共转染应用

使用说明

  • 1. 培养细胞至其汇合度达60~80%;
    注意:
    ①请确认细胞在铺板前处于良好的生长状态;
    ②若在同一天内进行细胞铺板和转染,转染前可无需进行换液操作;若前一晚铺板,次日转染,需进行换液,可使用等体积新鲜培养基 (含血清和抗生素的完全培养基) 置换部分细胞原有上清。

    • 2. 制备核酸稀释液:参考表1或表2,使用减血清培养基 (货号 : CB018) 稀释 DNA/mRNA 或 siRNA,并用移液器轻轻吹打混匀;
      注意:
      减血清培养基可有效提高转染效率,也可用不含抗生素和血清的 DMEM 培养基替代 (高糖DMEM 或低糖 DMEM 均可)。

    • 3. 参考表1或表2,直接向核酸稀释液中加入相应计算量的低毒高效转染试剂,用移液器轻轻吹打混匀,室温静置孵育10~15min;
      4. 将步骤3得到转染试剂 - 核酸混合物逐滴加至细胞上清,轻摇混匀;
      5. 继续培养约12~48h后,即可用适当方式检测转染效果,如荧光检测、Western Blot、ELISA 或报告基因检测法等。

注意事项

1. 细胞生长状态是影响转染效率的关键!请务必选择传代次数相对较少,且生长状态良好的细胞进行转染实验;

2. 细胞培养基 pH 值偏低 (颜色偏黄) ,会显著降低转染效率;若此时不便完全换液,可选择半数换液法:即弃去一半上清,补加新鲜完全培养基;

3. 初次实验时,建议先在 96 孔板内摸索确定好最佳核酸 / 转染试剂比例,再于大体系中开展实验;

4. 本产品的推荐用量:

    ① DNA 或 mRNA:DNA 或 mRNA/ 转染试剂 = 1:4(μg/μL),但转染试剂使用量受细胞类型及其它实验因素影响,建议初次使用时可固定核酸用量 (如:96 孔板,推荐100ng) ,在 DNA或mRNA/转染试剂=1:0.5~1:7 (μg/μL) 的范围内,设置转染试剂用量梯度,以筛选出最佳转染用量;

    ② siRNA:在正式实验前,建议转染荧光标记的siRNA,通过流式或荧光显微镜考察细胞的siRNA摄取量,来确定合适的转染试剂 /siRNA比例以及siRNA用量。

5. DNA 或 mRNA 的初始储备浓度宜控制在 0.5~5 μg/μL 范围内;
siRNA 的推荐浓度为 15 μM,但仍需根据目标靶点的敲减难易程度,在 10-50 μM 范围内进行微调;
调整时,转染试剂与 siRNA 的用量比例尽量保持不变。

6. 个别细胞 (如HeLa、A549、THP-1、CHO-K1、HEK 293T等) 比较敏感,会因单位细胞DNA或siRNA摄入量过高而产生毒性 (非转染试剂原因) 。

    解决方案:① 可通过降低DNA或siRNA使用量,或提高细胞密度,或在转染6h后换液等操作,来降低细胞DNA或siRNA摄入量以降低单位毒性;同时,选择在转染后12~24h内检测细胞转染效果;

                      ② 若方法①仍无法解决问题,建议更换新细胞,或检测细胞是否有支原体等微生物感染,并加以清除后再开展实验。

    mRNA转染无此问题;

7. 本产品为无菌包装,无需过滤,请注意无菌取用;

8. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作;

9. 本产品仅限科研使用。

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