产品概述

Omni-Rapid^TM快速蛋白定量试剂盒的原理与传统BCA蛋白定量法类似，但采用了一种不同于BCA(Bicin-choninic Acid)的全新特殊的螯合剂，从而实现了对蛋白质浓度进行快速、稳定、灵敏的测定。其原理是在碱性环境下蛋白质分子中的肽键能与Cu²⁺形成络合物，将Cu²⁺还原成Cu⁺，Cu⁺与螯合物结合，从而发生颜色反应。本试剂盒中的螯合剂可敏感特异地与Cu⁺结合，只需室温孵育5min即可形成稳定的橙黄色水溶性复合物，而传统BCA法则需在37℃下孵育30min才可完成颜色反应。该橙黄色的复合物在480nm处有强光吸收值，颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，可根据吸收值的大小来测定蛋白质的含量。本试剂盒含有一系列浓度的蛋白质标准品溶液(BSA溶液),即取即用，无需稀释，方便快捷。

产品内容

使用说明

• 以微孔酶标仪法为例:
• 步骤1:

  配置显色工作液：
  a. 计算显色工作液总量：
      工作液总量 = (BSA标准品样本个数＋待测样本个数)×复孔数×每个样本显色工作液体积
      举例：BSA标准品样本个数为8个，待测样本个数3个，复孔数3个。
      显色工作液总量 = (8个BSA标准品样本＋3个待测样本)×3个复孔×200μL(每个样本工作液体积) = 6.6 mL
  b. 根据计算出的所需显色工作液用量，将试剂A和试剂B按照50:1的体积比，配制显色工作液，充分混匀。
      注意：
          ⑴试剂B刚加入试剂A时，会出现灰蓝色沉淀，但只需混匀几秒钟，沉淀就会消失，形成透亮的绿色溶液；
          ⑵建议工作液现用现配，在室温下，工作液会逐渐变为深绿色，但只要在1.5h内使用，对定量的准确性不会造成影响。
          ⑵由于加样可能存在误差，建议配制BCA工作液时，多配制1~2个孔。

• 步骤2:

  定量检测：
  ① 分别取 即用型BSA标准品①~⑧ 各20μL加到 96孔板中( BSA标准品 使用前须充分溶解摇匀)
  
  ② 用1×PBS或0.9%生理盐水将样品适当稀释(可以多作几个梯度，如2倍、4倍、8倍稀释)，加20μL到96孔板的样品孔中；
  ③ 各孔加入200μL显色工作液，充分混匀，盖上96孔板盖，室温孵育5min，即可进行检测；
      注意：由于颜色反应速度较快，须保证在20~30min之内完成读值。如果必须在30min后才能读值，可提前加入50μL 1 M HCl终止反应。
  ④ 用酶标仪测定每个样品及BSA标准品的A480，注意要减去空白对照( 标准品① ＋工作液)的A480。
  ⑤ 绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度。
      注意：数据处理时需要去除明显错误的值。待测样品浓度可以从标准曲线中查得, 实际浓度需要乘以样品的稀释倍数。如果是计算机绘制的曲线，可以从计算机给出的线性方程式计算出待测样品的浓度。