产品概述

BCA蛋白定量法是目前广泛使用的蛋白定量方法之一。本产品是基于BCA(Bicin-choninic Acid)法研制而成，实现了对蛋白质进行快速、稳定、灵敏的浓度测定。其原理是在碱性环境下蛋白质分子中的肽链结构能与Cu²⁺络合生成络合物，同时将Cu²⁺还原成Cu⁺，BCA试剂可敏感特异地与Cu⁺结合，形成稳定的有颜色的复合物，其在562nm处有高的光吸收值，颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，可根据吸收值的大小来测定蛋白质的含量。本试剂盒含有牛血清白蛋白(BSA)溶液作为蛋白质标准品溶液，测定范围为20~2,000μg/mL。

使用说明

• 以微孔酶标仪法为例:
• 步骤1:

  稀释BSA标准品：
      取120μL蛋白标准品(需完全融解)，用与待测蛋白样品相一致的稀释液稀释至300μL，使终浓度为2mg/mL。
      注意：为方便起见，也可以用0.9%生理盐水或PBS缓冲液稀释标准品。

• 步骤2:

  配置显色工作液：
  a. 计算显色工作液总量：
      工作液总量 = (BSA标准品样本个数＋待测样本个数)×复孔数×每个样本显色工作液体积
      举例：BSA标准品样本个数为9个，待测样本个数3个，复孔数3个。
      显色工作液总量 = (9个BSA标准品样本＋3个待测样本)×3个复孔×200μL(每个样本工作液体积) = 7.2 mL
  b. 根据计算出的所需显色工作液用量，将试剂A和试剂B按照50:1的体积比，配制显色工作液，充分混匀：
      注意：
          ⑴由于加样可能存在误差，建议配制BCA工作液时，多配制1~2个孔的量；
          ⑵新配制的BCA工作液室温密封条件下可稳定保存24h。

• 步骤3:

  定量检测：
  ① 将稀释后的标准品按 0，1，2，4，6，8，10，15，20μL分别加到96孔板中，加入用于稀释标准品的溶液补足到20μL(为避免枪尖损失，可先补足稀释液后加入标准品)
  
  ② 将样品适当稀释(可以多作几个梯度，如 2倍、4倍、8倍稀释)，加20μL到 96 孔板的样品孔中；
  ③ 各孔加入200 μL显色工作液，充分混匀，盖上96孔板盖，37℃孵育30 min，冷却至室温；
      注意：也可以室温放置2h，或60℃放置30min。BCA法测定蛋白浓度时，吸光度会随着时间的延长不断加深。并且显色反应会因温度升高而加快。如果蛋白浓度较低，可在较高温度孵育，或延长孵育时间。
  ④ 用酶标仪测定每个样品及BSA标准品的A562，或540~590 nm之间的其它波长的吸光度，注意要减去空白对照(稀释液＋工作液)的吸光度。
  ⑤ 绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度。
      注意：数据处理时需要去除明显错误的值。待测样品浓度可以从标准曲线中查得, 实际浓度需要乘以样品的稀释倍数。如果是计算机绘制的曲线，可以从计算机给出的线性方程式计算出待测样品的浓度。