产品概述

本产品可以从动物细胞或组织中方便高效地分离细胞膜蛋白和细胞浆蛋白，其提取的膜蛋白不仅包括质膜的膜蛋白，也包括线粒体膜、内质网膜和高尔基体膜等的膜蛋白。

本试剂盒采用了新型高效的去污剂配方，首先使用温和去污剂透化细胞，释放可溶性胞浆蛋白，然后用另一种去污剂溶解膜蛋白，其提取效率会随内在膜蛋白跨越脂双层的次数不同而有所变化。对于具有至少1~2个跨膜结构域的蛋白，提取效率通常高达90％，膜组分中的胞浆蛋白的交叉污染通常小于10%。该方法有效避免了基于疏水性的提取方法中需要进行相分离的问题，具有更好的重现性和更高的得率。

使用说明

将融化后的试剂B和试剂C置于冰上，使用前请添加1×蛋白酶抑制剂(货号GRF101)或1×蛋白酶和磷酸酶抑制剂(货号：GRF103)

• 一、

  贴壁培养的动物细胞
  1.弃去培养皿中的培养基，加入3mL试剂A，用细胞刮刀将细胞从培养皿表面刮下，将细胞重悬。取5×10⁶个细胞至离心管中，300×g离心5min，吸弃上清；
  2.用1mL试剂A重悬细胞沉淀，并转移至1.5mL离心管中，300×g离心5min，吸弃上清；
  3.取0.75mL试剂B加入到细胞沉淀中，移液器轻轻吹打多次以获得均质的细胞悬液，置于旋转混匀仪上，4℃孵育10min；
  4.将孵育后的细胞离心15min(16,000×g，4℃)，小心吸去含有胞浆蛋白的上清液，如有需要可转移至新离心管中，置于冰上或分装后储存于-80℃备用；
     注意：为降低胞浆组分对细胞膜组分的污染，尽可能弃尽上清。
  5.取0.5mL试剂C加入到细胞沉淀中，移液器轻轻吹打多次以获得均质的细胞悬液，置于旋转混匀仪上，4℃孵育45min；
  6.将孵育后的细胞离心15min(16,000×g，4℃)，将含有可溶性膜蛋白和膜相关蛋白的上清液转移至新离心管中，置于冰上或分装后储存于-80℃备用。

• 二、

  悬浮培养的动物细胞
  1.取5×10⁶个细胞至离心管中，300×g离心5min。用3mL试剂A重悬细胞沉淀，300×g离心5min，吸弃上清；
  2.用1mL试剂A重悬细胞沉淀，并转移至1.5mL离心管中，300×g离心5min，吸弃上清；
  3.取0.75mL试剂B加入到细胞沉淀中，移液器轻轻吹打多次以获得均质的细胞悬液，置于旋转混匀仪上，4℃孵育10min；
  4.将孵育后的细胞离心15min(16,000×g，4℃)，小心吸去含有胞浆蛋白的上清液，如有需要可转移至新离心管中，置于冰上或分装后储存于-80℃备用；
     注意：为降低胞浆组分对细胞膜组分的污染，尽可能弃尽上清。
  5.取0.5mL试剂C加入到细胞沉淀中，移液器轻轻吹打多次以获得均质的细胞悬液，置于旋转混匀仪上，4℃孵育45min；
  6.将孵育后的细胞离心15min(16,000×g，4℃)，将含有可溶性膜蛋白和膜相关蛋白的上清液转移至新离心管中，置于冰上或分装后储存于-80℃备用。

• 三、

  动物组织样品
     注意：由于处理组织样品试剂使用量需加倍，本试剂盒10次和50次规格可分别处理组织样品5次和25次。
  1.将20~40mg动物组织置于离心管中，加入4mL试剂A进行清洗，短暂涡旋并弃掉清洗液(可重复清洗一次)；
  2.将组织转移至2mL离心管中并用剪刀将其剪切成小块，加入1mL试剂B重悬组织小块，转移至冰上预冷的1mL匀浆器中研磨，直到形成均一的悬液；
     注意：为充分转移组织小块，可用剪刀剪短移液器吸头末端，便于使用移液器吸起组织小块。
  3.向悬液中加入0.5mL试剂B并转移至一个新的2mL离心管中，置于旋转混匀仪上4°C孵育10min；
  4.将孵育后的样品离心15min(16,000×g，4℃)，小心吸去含有胞浆蛋白的上清液，如有需要可转移至新离心管中，置于冰上或分装后储存于-80℃备用；
     注意：为降低胞浆组分对细胞膜组分的污染，尽可能弃尽上清。
  5.取1mL试剂C加入到沉淀中，移液器轻轻吹打多次以获得均质的细胞悬液，置于旋转混匀仪上，4℃孵育45min；
  6.将处理后的样品离心15min(16,000×g，4℃)，将含有可溶性膜蛋白和膜相关蛋白的上清液转移至新离心管中，置于冰上或分装后储存于-80℃备用。