本产品可以用于纯化各种表达系统融合表达的His重组蛋白，其是以高度交联的 4%琼脂糖凝胶为基质，通过化学方法偶联三配位的亚氨基二乙酸(IDA)，并螯合镍离子(Ni2+)，形成比较稳定的平面四边形结构，从而有更多的位点与His标签上的咪唑环继续配位，达到结合目的蛋白的效果。
样本处理(以大肠杆菌表达系统为例)
1. 离心收集大肠杆菌(4℃，4,000×g，30min)，弃上清；
2. 用冷平衡缓冲液重悬细胞，同时加入蛋白酶抑制剂(货号：GRF101)；
注：所用试剂中不能含有 EDTA、EGTA 等螯合剂，DTT、巯基乙醇等还原剂，尿素、盐酸胍等变性剂。
3. 用超声波破碎法在冰上破碎菌体，直到样品破碎完全；
4. (可选)如果裂解物太过粘稠，可以加入RNase A(终浓度10μg/mL)和DNase I(终浓度5μg/mL)并在冰上孵育10~15min；
5. 离心收集上清(4℃，12,000×g，20min)；
6. SDS-PAGE分析His融合蛋白的含量及可溶性；
纯化重组His融合蛋白
7. 轻轻重悬His标签蛋白纯化琼脂糖凝胶，吸取适量加入重力柱中，用5~10倍柱体积的冷平衡缓冲液平衡His琼脂糖凝胶；
8. 将步骤5制备好的含有His融合蛋白的上清液加入到纯化柱中，流速控制为0.5~1mL/min；
9. 蛋白上清液全部流出纯化柱后，立刻加入漂洗缓冲液清洗纯化柱，所需量大约为柱体积的10~20倍或者直到流出液的A280值达到最低且稳定；
10. 用5~10倍柱体积的现配洗脱缓冲液 以0.5~1mL/min的流速洗脱，收集洗脱液。或者根据流出液A280值判断，当数值陡然上升时开始接收洗脱液，直到A280数值降至最低且稳定时，停止收集。后续可根据目的蛋白的性质和用途，4℃透析到20mM Tris-HCl，pH8.0或者1×PBS，pH7.4中。
凝胶再生及储存
11. 使用5倍纯化柱体积去离子水清洗琼脂糖凝胶填料；
12. 使用5倍柱体积100mM EDTA(pH 8.0)剥落镍离子；
13. 使用10倍柱体积去离子水清洗填料；
14. 使用5倍柱体积0.5M NaOH清洗填料；
15. 使用10倍柱体积去离子水清洗填料；
16. 使用3~5倍柱体积100 mM NiSO4再生挂镍；
17. 使用10倍柱体积去离子水清洗，即完成琼脂糖凝胶填料再生。
注：填料再生后，可以立即使用，如不立即使用，需要将填料悬浮于等体积的20%乙醇中，置于4℃保存。
1. 琼脂糖凝胶应保存在储存溶液中，防止干燥；
2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作；
3. 本产品仅限科研使用。
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